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目前全世界每年約產(chǎn)染料70萬t，我國年產(chǎn)量已達(dá)15萬t，這其中約有10%～15%排放到環(huán)境中［1］．且有些染料殘留可能致畸變或癌變，嚴(yán)重威脅人類生存環(huán)境［2］．染料廢水通常通過物理或化學(xué)方法處理，包括吸附、光催化、膜過濾等，物理化學(xué)處理法雖然對廢水色度去除率較高，但COD去除率較低，且存在處理費(fèi)用高、可能引起二次污染等問題［3～4］．因此尋找清潔環(huán)保的染料降解脫色技術(shù)是目前一項(xiàng)迫切的任務(wù)．

漆酶(Laccase，EC1.10.3.2)是一類可降解木質(zhì)素的含銅多酚氧化酶，漆酶能促進(jìn)木質(zhì)素及其前體物質(zhì)分子或前體物質(zhì)分子類似物等環(huán)境污染物的降解，在紙漿生物漂白、染料的脫色及其廢水凈化、污染物質(zhì)脫毒與降解等方面有著巨大的應(yīng)用潛力［5］．

采用漆酶直接對染料進(jìn)行脫色降解，以及利用漆酶介體系統(tǒng)，漆酶染料中間體和固定化漆酶對染料降解的研究已引起了國內(nèi)外的廣泛關(guān)注并取得了較好的脫色降解效果［6～11］．蜜環(huán)菌是一種重要的藥用真菌，也是一種木腐菌，有較強(qiáng)的木質(zhì)素分解能力，蜜環(huán)菌的木質(zhì)素分解能力與其代謝過程中合成的木質(zhì)素相關(guān)分解酶有關(guān)，對蜜環(huán)菌的前期發(fā)酵研究表明，蜜環(huán)菌在次級生長代謝階段能合成一定量的胞外漆酶，蜜環(huán)菌漆酶具有較好的熱穩(wěn)定性，使該酶在多酚類化合物脫毒轉(zhuǎn)化和印染廢水脫色降解等環(huán)境保護(hù)中具有潛在應(yīng)用價值［12］．目前對蜜環(huán)菌漆酶及其應(yīng)用方面的研究較少，本研究從蜜環(huán)菌漆酶的應(yīng)用入手，主要分析了蜜環(huán)菌粗漆酶液對印染工業(yè)中的2種常見蒽醌類染料:活性艷藍(lán)KN-R和活性艷藍(lán)X-BR進(jìn)行脫色研究，優(yōu)化其脫色降解條件，以期為蜜環(huán)菌漆酶在印染廢水脫色凈化方面的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)．

1·材料與方法

1.1菌株與試劑

蜜環(huán)菌(Amillariella mellea)購自中國科學(xué)院微生物研究所，活性艷藍(lán)KN-R和活性艷藍(lán)X-BR購自浙江閏土股份有限公司，其它試劑均為國產(chǎn)分析純．

1.2培養(yǎng)基

固體種子培養(yǎng)基:綜合馬鈴薯培養(yǎng)基(CPDA)(g·L－1):葡萄糖20 g，新鮮土豆200 g(煮沸30 min取濾液)，KH2PO4 3 g，MgSO4·7H2O 1.5 g，VB110mg，水1 000 mL，pH自然．基礎(chǔ)產(chǎn)酶培養(yǎng)基［13］(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，有小部分調(diào)整):葡萄糖2%，蛋白胨0.2%，MgSO4·7H2O0.15%，KH2PO4 0.3%，CaCl20.001%，VB10.001%，微量元素80 mL．微量元素混合液組成［14］:氨基乙酸7.8×10－3mol，MgSO4·7H2O 1.2×10－2mol，MnSO4·H2O 2.9×10－3mol，NaCl 1.7×10－2 mol，F(xiàn)eSO4·7H2O 3.59×10－4mol，CoCl27.75×10－4mol，CaCl2·2H2O 9.0×10－4mol，ZnSO4·7H2O 3.48×10－4mol，CuSO4·5H2 O 4×10－5mol，KAl(SO4)2·12H2O 2.1×10－5mol，HBO31.6×10－4mol，NaMnO44.1×10－5mol．

1.3粗酶液的的制備

取產(chǎn)酶高峰期的發(fā)酵液，于4 000 r·min－1常溫離心15 min，上清液即為漆酶粗提液．

1.4漆酶酶活的測定［15］

以愈創(chuàng)木酚為底物，4 mL 50 mmol·L－1(含1mmo·lL－1愈創(chuàng)木酚)琥珀酸鈉緩沖液(pH4.5)，加入1 mL酶樣液，混合均勻后置于30℃水浴保溫反應(yīng)30 min，于465 nm處測光吸收值．定義每min氧化1μmol愈創(chuàng)木酚的酶量為一個酶活力單位．

1.5活性艷藍(lán)KN-R和活性艷藍(lán)X-BR吸收光譜的測定

用蒸餾水把活性艷藍(lán)KN-R和活性艷藍(lán)X-BR配成2 g·L－1的母液，測定時將溶液稀釋到線性范圍內(nèi)，以蒸餾水為參比，進(jìn)行光譜掃描活性艷藍(lán)KN-R的最大吸收峰在592 nm處(圖1)，活性艷藍(lán)X-BR的最大吸收峰在600 nm(圖2)．