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綜合考慮耐受性及脫色效果,選擇酸性黑ATT作為脫色實(shí)驗(yàn)染料.該菌對(duì)酸性黑ATT的最大耐受極限為1.9 g/L.其脫色效果受溫度、pH值、裝液量和培養(yǎng)時(shí)間的影響較大.酸性黑ATT的最佳脫色條件為:pH值為7.0,溫度為28℃,培養(yǎng)基裝液量為60 mL,接種量為4%,培養(yǎng)時(shí)間為4 d.在此條件下,菌株對(duì)酸性黑ATT的脫色率可達(dá)93.30%.

關(guān)鍵詞:球衣菌;染料;耐受性;脫色特性

印染廢水是我國主要的工業(yè)污染水之一,內(nèi)含多種有毒難降解的染料.目前,有關(guān)該類廢水的處理方法有物理化學(xué)方法和生物方法.其中生物法由于其高效、簡易和脫色率高而受到重視.國內(nèi)外學(xué)者對(duì)染料的微生物脫色降解進(jìn)行了一系列研究[1-5].這些研究表明,利用微生物處理印染廢水是一條可行的途徑.球衣菌是活性污泥中一類重要的絲狀菌,通常分布于小溪、湖泊、泉水等淡水環(huán)境和污水處理系統(tǒng)及輸水管道中[6].目前,球衣菌已廣泛應(yīng)用于污水處理、生產(chǎn)生物可降解材料PHB、生物監(jiān)測(cè)、富集重金屬等方面[7-10].但有關(guān)球衣菌對(duì)染料廢水的脫色研究尚未見相關(guān)報(bào)道.本文用富集、平板劃線等方法從福州祥坂污水處理廠的活性污泥中分離到一株球衣菌,并就其對(duì)染料的耐受性及脫色特性進(jìn)行了研究,旨在為進(jìn)一步開展此類廢水的工業(yè)化處理提供優(yōu)良的微生物菌源及相關(guān)理論依據(jù).

1·材料與方法

1.1菌種來源和染料

菌種來源:福州祥坂污水處理廠曝氣池各點(diǎn)活性污泥混合液20份.染料:直接耐曬黑、酸性黑ATT、堿性棕、堿性橙、堿性品藍(lán)、孔雀石綠,均為工業(yè)用產(chǎn)品.其中直接耐曬黑、酸性黑ATT、堿性棕、堿性橙等為偶氮染料,酸性黑ATT最大吸收波長為596.5 nm.

1.2培養(yǎng)基

1.2.1富集培養(yǎng)基

尿素培養(yǎng)基(g/L):尿素0.5,葡萄糖1.0,MgSO4·7H2O 0.05,K2HPO40.1,pH 7.0.

1.2.2分離純化培養(yǎng)基

CGY培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨5.0,酵母膏1.0,甘油10.0,瓊脂20,pH 7.0.Stoke培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖1.0,蛋白胨1.0,MgSO4·7H2O 0.2,CaCl20.05,FeCl30.01,瓊脂20,pH 7.0.

1.2.3耐受性實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基

同Stoke培養(yǎng)基,不同的是加入各種不同濃度不同種類的染料.

1.2.4脫色實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基

同CGY培養(yǎng)基,不同的是加入酸性黑ATT染料,質(zhì)量濃度為0.1 g/L.

1.3球衣菌的富集、分離及初步鑒定

1.3.1富集培養(yǎng)

分別吸取各點(diǎn)活性污泥混合液0.5 mL,接入裝有4.5 mL富集培養(yǎng)基的試管中,28℃靜止培養(yǎng)24~48 h,如發(fā)現(xiàn)有半透明絮狀小團(tuán)塊飄浮于液體中,小心用接種針先挑取出少量,鏡檢結(jié)果表明為球衣菌時(shí),即可進(jìn)行分離.

1.3.2分離培養(yǎng)

將富集培養(yǎng)液內(nèi)出現(xiàn)的絮狀團(tuán)塊,用接種針挑出,先在無菌水中洗滌一次,然后在已制好的Stoke瓊脂平板上進(jìn)行劃線分離,28℃培養(yǎng)24 h后,對(duì)光仔細(xì)檢查,如在劃線條的兩側(cè)邊緣有絲狀體緊貼平板向外伸出,可用低倍鏡進(jìn)行初步鏡檢.如為球衣菌,應(yīng)及時(shí)挑取離中間雜菌較遠(yuǎn)的絲狀體在新的平板上進(jìn)行劃線,這樣經(jīng)過3~4次重復(fù)劃線分離,即可提取出純化的菌株.

1.3.3菌種鑒定

參照文獻(xiàn)[6],對(duì)該菌株的細(xì)胞形態(tài)、培養(yǎng)特征和生理生化特征進(jìn)行初步鑒定.

1.4菌株對(duì)染料的耐受性研究

將分離到的菌株接種于新鮮的CGY斜面,28℃培養(yǎng)3 d后,用無菌水稀釋制備成10-4,10-5,10-6菌懸液涂布于各種耐受性實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基固體平板上,于28℃下培養(yǎng)2 d,觀察菌株在各種染料及其相應(yīng)各種濃度中的生長情況及脫色效果.

1.5染料脫色條件的研究

將菌株接入新鮮的CGY斜面培養(yǎng)基中,28℃培養(yǎng)3 d進(jìn)行活化,活化后再轉(zhuǎn)移至新鮮的CGY液體培養(yǎng)基中,28℃培養(yǎng)2 d,以4%接種量接入裝有50 mL脫色實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的三角瓶中,于28℃下150r/min振蕩培養(yǎng)3 d,然后進(jìn)行脫色能力的測(cè)定.

1.6脫色能力的測(cè)定

從培養(yǎng)液中取出10 mL樣液,以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心20 min去除菌體,緩緩傾倒出上清液.以蒸餾水為參比,在酸性黑ATT最大吸收波長596.5 nm處測(cè)量上清液的吸光度,并根據(jù)下式計(jì)算染料的脫色率,以此表示菌株的脫色能力.

η=(A0-A)/A0×100%,

式中η為脫色率,A0為脫色前樣品的吸光度(OD值),A為脫色后樣品的吸光度(OD值).

2·結(jié)果與分析

2.1活性污泥混合液中球衣菌的分離和初步鑒定采用富集、平板劃線等方法從福州祥坂污水處理廠的活性污泥混合液中分離到1株球衣菌.

2.1.1菌株的細(xì)胞形態(tài)特征

將該菌株分別在尿素培養(yǎng)基和CGY培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)48 h,染色觀察該菌株的細(xì)胞形態(tài)特征。