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從圖4和表2可以看出，噴霧干燥得到的絲膠和2種方法提取的絲膠在遠(yuǎn)紫外區(qū)185～250 nm范圍內(nèi)無明顯的雙負(fù)峰，因此絲膠蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)沒有a螺旋構(gòu)象，這與表2分析的結(jié)果一致，a螺旋所占的摩爾百分比為零。噴霧干燥得到的絲膠和2種方法提取的絲膠在198 nm左右都出現(xiàn)強的負(fù)吸收峰，這主要是無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)的特征吸收L1，因此絲膠二級結(jié)構(gòu)以無規(guī)卷曲構(gòu)象為主，所占的摩爾百分比為56左右(見表2)。表2結(jié)果表明，與噴霧干燥得到的絲膠相比較，2種方法提取的絲膠對蛋白二級結(jié)構(gòu)分子構(gòu)象的影響主要在于使不同比例的J3折疊結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化為B轉(zhuǎn)角。這種構(gòu)象的變化可能與溶解度下降有關(guān)，對蛋白質(zhì)其他功能性質(zhì)的影響有待進(jìn)一步研究。2．3．2紅外光譜分析通過紅外光譜的測定分析2種方法提取的絲膠固體粉末中蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)分子構(gòu)象的變化，結(jié)果如圖5所示。根據(jù)表3所示的蛋白二級結(jié)構(gòu)分子構(gòu)象紅外光譜特征譜帶和蛋白質(zhì)特征吸收峰的歸屬?？芍?，3 300 cm-1是酰胺A N～H伸縮振動和O—H伸縮振動特征吸收峰，1 650～1 660 cm-1譜峰是酰胺I C～O伸縮振動，1 530 cm-1譜峰為酰胺IIC—N伸縮振動和N—H面內(nèi)變形振動，1 230～1 240cm-1譜峰為酰胺III C—N伸縮振動和N～H面內(nèi)變形振動，600 700 cm-1譜峰為酰胺IV N—H面外變形振動。從圖5看出，噴霧干燥、醇沉和酸析得到的絲膠光譜在3 300cm左右都有明顯的單峰，是蛋白質(zhì)N—H伸縮振動和O—H伸縮振動特征吸收峰；在以無規(guī)卷曲構(gòu)象特征吸收的酰胺I譜帶1 650～1 660 cm-1處都有強的吸收峰，酰胺III1 235 cm-1附近處都有吸收峰，說明絲膠主要都是以無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)為主，這與CD光譜分析的結(jié)果相似。在8折疊構(gòu)象特征吸收的酰胺II 1 515～1 525 cm-1處醇沉和酸析得到的絲膠有明顯的單峰，證實有8折疊的存在，而噴霧干燥得到的絲膠沒有特征吸收，其1 546 cm-1處的特征吸收歸屬于無規(guī)卷曲構(gòu)象特征吸收的酰胺II，這說明噴霧干燥得到的絲膠無規(guī)卷曲的構(gòu)象所占的摩爾比較高，這與CD光譜分析的結(jié)果相符，說明噴霧干燥得到的絲膠分子構(gòu)象比較柔軟，因此這可能是其溶解度相對比較高的原因。與噴霧干燥得到的絲膠粗蛋白相比，醇沉和酸析得到的絲膠在2 950～2 850 cm-1處的2個吸收峰和1 400～1 450 cm-1處的2個吸收峰有細(xì)微的差異，這可能與經(jīng)過酸處理和醇處理后蛋白的微細(xì)結(jié)構(gòu)的變化有關(guān)，如cD光譜分析的結(jié)果所示酸處理和醇處理使絲膠蛋白二級結(jié)構(gòu)分子構(gòu)象中8轉(zhuǎn)角構(gòu)象的比例增加。引起這種構(gòu)象變化原因有待于進(jìn)一步研究。3結(jié)論(1)與酸析法相比，低溫乙醇沉淀法提取率較高，易去除乙醇，產(chǎn)品的灰分低，可有效地去除蠶腥味，而且所需設(shè)備簡單，成本低，因此低溫乙醇沉淀法是一種從絲綢生產(chǎn)廢水中提取絲膠的新方法。(2)由于低溫乙醇沉淀法提取的絲膠溶解度有所下降，因此通過CD和IR分析低溫乙醇沉淀法提取的絲膠蛋白二級結(jié)構(gòu)分子構(gòu)象的變化，結(jié)果表明：低溫乙醇沉淀法提取的絲膠蛋白二級結(jié)構(gòu)主要是以無規(guī)卷曲的構(gòu)象為主，因此低溫乙醇沉淀法提取的絲膠分子具有一定的柔性，有較好的水溶性。此外，醇處理對構(gòu)象的影響主要是使口轉(zhuǎn)角構(gòu)象的比例增加，這種構(gòu)象的變化可能與溶解度下降有關(guān)。